Cos'è una Coltura Liquida di Micelio, aka liquid culture?
La conservazione di micelio per la propagazione su grain spawn è un aspetto fondamentale nella coltivazione.
Le colture di micelio si possono conservare principalmente in due modi, su piastre di agar o in una coltura liquida (aka. liquid culture, LC).
Differenza? Solo una!
Le piastre di agar sono composte da:
acqua + agar agar + nutrimento
La coltura liquida da:
acqua + nutrimento
Quali sono i vantaggi e gli svantaggi principali nell'utilizzare coltura liquida anziché piastre di agar?
I vantaggi principali sono principalmente 3
- Possibilità di lavorare anche in ambienti non sterili (attraverso l'uso di siringhe ed aghi sterili)
- Possibilità di utilizzarla per inoculare grossi quantitativi di cereale sterile
- Possibilità di conservarla per lungo tempo (in frigo)
Lo svantaggio invece è principalmente 1
- Difficoltà nel vedere certi tipi di contaminazioni
Come si prepara una coltura liquida?
1. Per prima cosa bisogna avere un barattolo ed avere un tappo per colture liquide.
Questo tappo deve avere una porta d'iniezione ed un filtro per il passaggio dell'aria. Date un occhiata a questi tappi per avere un idea!
Il filtro permetterà al vostro micelio di respirare mantenendo lontane le contaminazioni. Mentre la porta d'iniezione vi permetterà di usare aghi e siringhe sterili per l'inoculazione della LC e per prelevare LC da usare per inoculare del cereale sterile.
2. Unite acqua e il vostro nutriente scelto (per esempio: l'estratto di malto) ad una concentrazione di massimo il 4% nel barattolo (eg. 4g per 100ml di acqua), mettete il tappo, e sterilizzate in una pentola a pressione per 15 minuti a 15 psi (1 bar).
Se la vostra pentola a pressione raggiunge pressioni minori il tempo sarà maggiore. Assicuratevi di non sigillare completamente il barattolo con il tappo, lasciatelo parzialmente avvitato ma assicuratevi di sigillarlo immediatamente appena aprirete la pentola alla fine del ciclo (senza bruciarvi!).
Mettete della stagnole sopra il tappo per proteggere il filtro dall'acqua.
TIP: Fa comodo inserire un'ancoretta magnetica per agitatori magnetici dentro il barattolo per poter mischiare facilmente la vostra coltura durante la crescita. Ma questo non è necessario. Potete mischiare il liquido all'interno con una rotazione del polso o usando una siringa: tirando su liquido e iniettarlo di nuovo dentro il barattolo, questo farà in modo di separare le ife del micelio in crescita e di favorire lo sviluppo.
Come si inocula una coltura liquida?
Una volta che la vostra LC è sterilizzata e raggiunta temperatura ambiente, potete inocularla.
Per l'inoculazione consigliamo di usare una siringa di coltura liquida, sia per semplicità che per velocità di crescita. Si può anche inoculare con micelio su agar, ma se questo non viene fatto in ambiente sterile si rischia di contaminare la coltura, visto che il barattolo andrà aperto per inserirvi dentro l'agar. Altrimenti è possibile anche l'inoculazione con una siringa di spore. Questo però non è raccomandato poiché la sterilità di spore non è garantita e c'è quindi un rischio che la coltura si contamini. Ma risultati positivi sono senza dubbio possibili anche così.
Una volta inoculata lasciatela a temperatura ambiente preferibilmente sopra i 20C, per una o due settimane e quando vedrete un cumulo di crescita di micelio potete cominciare a mischiarla. Appena vedrete che gran parte del liquido è composto da pezzetti di micelio denso, sarà pronta per essere usata.
Come si utilizza una coltura liquida?
Prendete un ago ed una siringa sterile, tirate su il vostro micelio ed iniettatelo dentro un sacco o un barattolo di cereali sterilizzati.
Ora sapete quale ruolo ricopre la coltura liquida nella coltivazione di funghi e come prepararla! Se volete saltare alcuni dei passaggi abbiamo preparato un kit di coltura liquida che vi permetterà di averla già pronta in un barattolo senza bisogno di sterilizzarla!
